Trag

Aus Proto-Slavic *sit, aus Proto-Indo-European *tregh-, eine Variation von *dhregh- (“ziehen, ziehen, ziehen”). Zu den Kognaten gehören lateinisch-traha und altirische Traig (“Fuß”). trag (third-person singular present indikativ tradzi/tradze, past participle trapté) trag n (definite singular tragjä, dative tragjän, definite plural traga, dative tragom) From Vulgar Latin *sa, from Latin trahé. Vergleichen Sie rumänische Tragödie, trag. Proteinreinigung. Bei Überproduktion wurden Brühekulturen der angegebenen E. coli-Stämme bei 30°C angebaut. Die Isopropyl–d-thiogalactopyranoside (IPTG)-vermittelte Induktion von Expression und Ernte, Resuspension und Einfrieren von Zellen wurde wie zuvor beschrieben durchgeführt (19). Weitere Schritte wurden bei 4°C oder auf Eis durchgeführt, sofern nicht anders angegeben. RP4 His6-TraG und TraI wurden wie zuvor beschrieben gereinigt (30, 38). His6-TraG187T wurde von SCS1(pFS241M) analog zu His6-TraG gereinigt. Sein 6-TraG-2 wurde wie folgt gereinigt.

SCS1(pGS006-2) Zellen (19,7 g, resuspendiert in 100 ml 200 mM Tris [pH 7.6]-20 mM Spermidine-HCl-2 mM EDTA) wurden aufgetaut, mit 200 ml Puffer A ergänzt und 90 min bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Zentrifugation bei 100.000 g für 45 min wurde der Überstand gehalten und das Pellet in 100 ml Puffer B mit einem Dounce Homogenisator resuspendiert. Die Suspension wurde wie bisher zentrifugiert und die Überräube der beiden Zentrifugationsschritte kombiniert. Proteine wurden durch Zugabe von 147 g (NH4)2SO4 (60% Sättigung), die durch Zentrifugation bei 25.000 g für 30 min gesammelt und in 35 ml Puffer C (Fraktion I, 35 ml) resuspendiert wurden, ausgefällt und in 35 ml Puffer C (Fraktion I, 35 ml) resuspendiert. Fraktion I wurde gegen Puffer C dialyziert und auf eine Ni-NTA-Spalte angewendet. Die Säule wurde mit Puffer C allein und mit Puffer C gewaschen, der 10% (vol/vol) Glycerin und 20 mM Imidazol (pH 7.6) enthält. Proteine wurden mit Puffer C eluiert, der 250 mM Imidazol (pH 7.6) enthält. Fraktionen, die His6-TraG2 enthalten, wurden gepoolt (Fraktion II, 97 ml), gegen Puffer D dialysiert und auf eine Phosphocellulose-P11-Säule aufgetragen. Adsorbierte Proteine wurden mit einem linearen Gradienten (40 bis 600 mM NaCl) in Puffer D eluiert.

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